Исследование аминокислотного состава является важным аналитическим методом для характеристики белков и пептидов и включает в себя расщепление этих соединений до свободных аминокислот, разделение последних, их идентификацию и количественное определение.
Наиболее распространенными путями определения аминокислот выступают обращённо-фазовая и катионообменная высококачественная жидкостная хроматография ВЭЖХ, а также электрофоретические методы и тандемная масс-спектрометрия МС.
Для изучения аминокислот выявлено достаточное количество методов, некоторые из которых, такие как методы ионообменной и газовой хроматографии, а также масс-спектрометрический анализ, мы рассмотрим.
Методы анализа аминокислот
Хроматографический метод
При хроматографическом разделении набор веществ в активном этапе перемещается сквозь стационарно закрепляемую (неподвижную) фазу. Выявлено, что звенья смеси из-за диспропорций в конструкции, способности к растворению, полярности или заряде вступают в нестандартную взаимосвязь со стационарной фазой, которая вызывает всевозможный темп транспортировки составных элементов.
Соразмерно агрегатному состоянию подвижной фазы распознают жидкостную хроматографию (ЖХ) и газовую хроматографию (ГХ). Помимо этого, по комплексу потенциальных конфигураций разделения рассматривают дальнейшие типы хроматографии: жидкость — твердая фаза (ЖТХ), жидкость —жидкость (ЖЖХ), газ — твердое тело (ГТХ) и газожидкостную (ГЖХ).
Ионообменная хроматография (например ионный хроматограф IC-2800).
После постановки условий исполнения количественной нингидринной реакции, двое ученых, Мур и Штейн, в 1948 году провели эксперимент по разделению 2,5 мг гидролизата сывороточного альбумина быка на колонке с крахмалом. Эффлюент был поделен на 400 секций, в каждой секции было выполнено нингидринное воздействие, и из равнодействующих кривых поглощения, аналогичных индивидуальным аминокислотам, учитывалось их молярное содержание в эссенции. На потомков большую импрессию оказали стремительный темп проверки (1 нед), малый объем сопоставляемого вещества и невысокий уровень отклонения ( ± 3 % ).
Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).
Именуемая также жидкостной хроматографией высокого давления, – один из многообещающих дедуктивных вариаций традиционной колоночной хроматографии в сегодняшнем приборном воплощении (например система высокоэффективной жидкостной хроматографии L-3000). Центром системы жидкостной хроматографии является насос, который эксплуатируется для подачи растворителя подвижной фазы и образца в колонку. Хроматографический инфузионный насос предоставляет давление, необходимое для преодоления сопротивления колонки, обеспечивая при этом стабильное давление (без пульсации) при точно контролируемом расходе. Метод ВЭЖХ широко применяется для целей количественного химического анализа в экологических, санитарно-гигиенических и ветеринарных исследованиях, при контроле качества и сертификации пищевой и сельскохозяйственной продукции, в медицине, фармацевтике, нефтехимии, криминалистике и пр.
Газовая хроматография.
Метод газовой хроматографии появился в 1952 г. благодаря таким ученым как Джеймс и Мартин; газовая хроматография является отличным методом химического анализа и выделяется очень хорошей производительностью. Из-за высокой проходимости потока подвижной фазы обеспечивается стремительная нормализация фазовой устойчивости. В качестве неподвижной фазы используют как правило силикон, полиэфир или полигликоль с использованием таких носителей, как цеолит, хромосорб, стерхамол и др. Размер колонки при стандартных разграничениях двигается от 1 до 6 м, при делении энантиомеров на капиллярных колонках, продолжительность последних насчитывается ISO метров. Газовая хроматография в паре с масс-спектрометром обеспечивает образцовую перспективу для выявления незнакомых аминокислот и пептидных конфигураций. Убедиться в этом можно на примере ГХ-МС GC-MS 3200, прибора с первой в данной сфере технологией высокоскоростной компенсации постоянного тока, с его помощью оптимизируется относительная оборотность течения ионов, эффективно улучшается разделение пиков. Благодаря регуляции функции химической ионизации (PCI), область применения прибора увеличивается, что положительно сказывается и на его общей производительности.
Масс-спектрометрический анализ аминокислот.
Концепция масс-спектрометрической оценки состоит в фиксировании фрагментарных ионов и радикалов, которые возникают при расщеплении начального, воспроизведенного электронным ударом, изобилующего энергией молекулярного иона. Для оценивания диапазона необходимо понимание устройства того, как ионизованная аминокислотная молекула осуществляет реакцию разложения.
