Процесс работы с нуклеиновыми кислотами и белками, а также их изучение 
и лабораторное исследование обобщенно называются блоттингом.
В зависимости от исследуемого вещества и его свойств могут применяться следующие методы блоттинга:
- Саузерн-блоттинг – первый метод блоттинга, открытый биологом из Англии Эдвином Саузерном.
Суть саузерн-блота заключается в разделении нуклеиновых кислот и белков на отдельные фрагменты и нитроцеллюлозную мембрану. Во время деления кислоты двигаются в агарозном геле и подвергаются воздействию электрического поля (электрофорезу).
Применение саузерн-блоттинга позволяет в дальнейшем проводить соединение адсорбированной ДНК и радиоактивного ДНК-зонда (РНК-зондом) по двум возможным вариантам: ДНК-ДНК и ДНК-РНК. Этот процесс называется гибридизацией ДНК. Метод саузерн-блота активно применяется для определения генетических заболеваний, определения ДНК-содержащих вирусов, определения кровного родства, а также активно применяется в криминалистике.
- Нозерн-блоттинг: метод действует по тому же принципу, что и саузерн-блоттинг, однако в большей степени ориентирован на работу с РНК-молекулами и их фрагментами. Применение нозерн-блота позволяет определить уровень экспрессии генов.
- Вестерн-блоттинг: метод блоттинга, позволяющий идентифицировать виды исследуемых белков, а также определить вирусные белки в генах.
Принципиально метод вестерн-блота отличается тем, что при разделении белков электрофорезом применяется полиакриламидный гель.
Вестерн-блоттинг бывает нескольких типов:
- Мокрый. Метод мокрого блоттинга считается самым точным и наиболее длительным. Это связано с временем, которое необходимо буферному раствору для того, чтобы вступить в реакцию, а также временем подготовки и очистки оборудования.
Обратите внимание! Метод мокрого блоттинга подразумевает использование буферных растворов и гелей для электрофореза. Качество получаемых результатов напрямую зависит от степени очистки прибора.
- Полусухой. Метод позволяющий использовать несколько трансферных гелей одновременно. Процесс исследования проходит несколько быстрее, чем при использовании систем мокрого блоттинга, однако качество полученных результатов менее чётко отображается.
- Сухой. Считается самым быстрым методом вестерн-блота, а также простотой применения. При методе сухого блоттинга используется крайне мало буферного раствора, что позволяет сохранять оборудование в чистоте.
Одной из разновидностей метода является фар-вестерн-блоттинг. Его процесс отличается от вестерн-блоттинга тем, что во время проведения исследования антитела заменяются другими белками.
Сауз-вестерн-блоттинг (другая разновидность вестерн-блота) отличается прежде всего тем, что после разделения белков с помощью электрофореза белки очищаются от натрия додецилсульфата с использованием мочевины в качестве реактива.
- Истерн—блоттинг так же, как и вестерн-блоттинг, применяется для идентификации видов белков и идентификации в генах вирусных белков. В отличие от вестерн-блота способен определять приобретённые модификации белков, а также липиды, остатки фосфатов и гликополисахариды, которые с ними взаимодействовали.
Порядок и механизм процедуры идентичны вестерн-блоту, однако в данном случае применяются антитела, восприимчивые не к белкам, а к их модификациям и определяемым элементам.
Фар-истерн-блоттинг – разновидность истерн-блота, особенностью которого является наличие дополнительного этапа подробного изучения модификаций белков, липидов и других взаимодействующих с белками элементов.
Фар-вестерн-блоттинг – другая разновидность истерн-блота, ориентированная на обнаружение всех осуществлённых взаимодействий по типу «белок-белок».
Проведение лабораторного анализа с применением блоттинга подразумевает использование специализированного оборудования – систем блоттинга.
Системы блоттинга подбираются в индивидуальном порядке в зависимости от направления и целей исследования.
Важно! На выбор, правильную работу устройства, а также корректные результаты исследования влияют и общелабораторные условия, такие как температура и степень влажности в помещении!
Компания «Элтемикс» предлагает широкий выбор систем блоттинга! Получить подробную консультацию и помощь в подборе подходящего оборудования можно у наших менеджеров, по номеру +7 (473) 204-53-02
