Получение одновременно ярких и четких и изображений стало возможным благодаря технологическому усовершенствованию блока точечной диафрагмы.
Блок точечной диафрагмы VAAS изменяет существующую концепцию конфокального микроскопа.
Общепринятым фактом считается то, что уменьшение размера точечной диафрагмы для устранения света от нефокальной плоскости является причиной более темных изображений. VAAS (система виртуальной адаптируемой диафрагмы) представляет собой новейшую разработку в области конфокальной микроскопии, которая ликвидирует блики с сохранением яркости изображений.
Преимущества:
1. Возможно получение более ярких изображений без бликов.
2. За счет деконволюции возможно моделирование различных срезов (разной толщины) после получения изображения.
3. Изображения как в фокальной плоскости, так и лежащее вне этой плоскости, могут быть получены за одно сканирование, что увеличивает скорость работы и уменьшает повреждение живых клеток.
Фото-конверсия флуоресцентного белка Kaede
Белок Kaede необратимо изменяет цвет флуоресценции с зеленого на красный из-за спектральной конверсии при воздействии на него излучения от ультрафиолетовой до фиолетовой области спектра. В момент фиксации изображения клетки HeLa, экспрессирующей Kaede с зеленой и красной флуоресценцией, при помощи лазеров с длиной волны 488 нм и 561 нм, в качестве возбуждающих, для фото-конверсии белок Kaede в изучаемой области непрерывно активировался лазером с длиной волны 405 нм. На фотографиях представлена дисперсия красной флуоресценции Kaede, вызываемой фото-конверсией. Длина волны активирующего лазера: 405 нм, длина волны лазера, фиксирующего изображение: 488 нм / 561 нм, размер изображения 512 х 512 пикселей, скорость захвата 1 к/с (при помощи гальванического сканера).
Динамика
Высокоскоростной резонансный сканер позволяет визуализировать динамику внутриклеточных процессов со скоростью 30 кадров в секунду (к/с) (с разрешением 512 х 512 пикселей). Кроме того, возможным стало также получение изображений со скоростью 420 к/с (с разрешением 512 х 32 пикселя). Гальванический (нерезонансный) сканер делает возможным получение изображения со скоростью в 10 к/с (с разрешением 512 х 512 пикселей) и 130 к/с (с разрешением 512 х 32 пикселя).
Взаимодействие
Синхронные процессы получения изображений и фотоактивации с помощью запатентованного гибридного сканера A1R+ раскрывают механизмы межмолекулярных процессов. Программное обеспечение для реализации методики FRET поставляется дополнительно.
Спектр
Быстрое получение спектрального изображения с 32-х канального спектрального детектора на максимальной скорости 24 к/с (512 х 32 пикселя). Функции спектрального разделения в реальном времени и виртуальной фильтрации расширяют возможности использования спектральных изображений.
Качество изображения
Эффективность флуоресценции увеличена на 30%, также увеличено отношение сигнал/шум. Благодаря разнообразным новым технологиям, таким как пинхол-блок с системой виртуальной адаптируемой диафрагмы (VAAS), было достигнуто наивысшее качество изображений.
В серии микроскопов А1+ технология малого угла падения лучей применена впервые на дихроичных зеркалах, благодаря чему увеличен уровень флуоресценции на 30 %.
Вместо квадратного точечного отверстия с плавным изменением размера впервые используется точечная диафрагма шестигранной формы. Благодаря этому при сохранении конфокальности достигается более высокая яркость, почти эквивалентная идеально круглому точечному отверстию (на 30%больше света!).
Для увеличения эффективности и предотвращения потери сигнала при обработке пиксельных данных системой оцифровки сигнала и при сбросе, в схеме процесса обработки изображений была реализована оригинальная разработка компании Nikon – технология двойной интегрированной обработки сигнала (DISP). Сигнал отслеживается в течение всего времени приема информации с пикселя, благодаря чему достигается чрезвычайно высокое соотношение сигнал/шум. Два интегратора работают параллельно во время считывания оптической информации, что позволяет избежать пропусков.
Аналитические функции
- Возможность изменять размер изображения в реальном времени
- Деконволюция
- Высокая скорость визуализации 3D-изображения
- Отображение многомерных изображений (nD Viewer)
- Синхронное отображение многомерных изображений (View synchronizer)
- Обработка различной измерительной и статистической информации
- Формирование обширной базы данных изображений
- Колокализация и FRET
Блок четырехканального детектора со сменными фильтрами
В стандартной конфигурации предусмотрена возможность одновременного наблюдения четырех флуоресцентных маркеров при использовании четырех лазеров. В каждый из трех держателей с фильтрами можно установить шесть блоков светофильтров, которые обычно используются для микроскопа.
Сшивка изображений в Z направлении для фиксации изображения поперечного сечения в реальном времени
Возможна высокая скорость получения изображений в направлении Z, а также в плоскости ХY. С помощью пьезомоторизованного Z-стола, можно получить произвольное изображение вертикального поперечного сечения. Это сечение может быть получено в реальном времени без необходимости строить трехмерное изображение.
Легкое дистанционное управление
Дистанционный пульт позволяет управлять основными настройками лазера, детектора и сканера при помощи простых нажатий на клавиши и поворота ручек управления.
Высокопроизводительные объективы для конфокального микроскопа
Новые объективы с высоким значением числовой апертуры (NA) обеспечивают интенсивную коррекцию хроматических аберраций в широком диапазоне длин волн, от ультрафиолета до инфракрасных лучей. Благодаря использованию эксклюзивной технологии нанокристаллического покрытия компании Nikon увеличилось и светопропускание. Объективы серии CFI Apochromat λS обеспечивают коррекцию хроматических аберраций в широком диапазоне длин волн от 405 нм, что позволяет применять эти объективы для получения многоцветных изображений. В частности, объектив LWD 40xWI λS обладает чрезвычайно широким диапазоном коррекции хроматических аберраций, от 405 нм и практически до инфракрасной части спектра. Объектив CFI Plan Apochromat IR 60xWI обеспечивает коррекцию хроматических аберраций до 1064 нм.
