Микроскоп Ti поддерживает различные виды регистрации изображений и методы его анализа, такие как многомерная регистрация изображений через заданные интервалы времени для получения временной, пространственной и спектральной информации о быстрых, динамичных процессах в живых клетках
Размеры
Стабилизация изображения живых клеток
Система Perfect Focus System (PFS) компании Nikon обеспечивает коррекцию смещенного фокуса в результате термического или механического воздействия в режиме реального времени. Использование системы Perfect Focus System (PFS) значительно улучшает качество изображений, полученных через заданные промежутки времени в длительных экспериментах.
Динамическая система фокусировки PFS автоматически корректирует смещение фокуса, вызванного термическими или механическими изменениями во время длительных наблюдений и при добавлении реагента. Изображения остаются в фокусе даже при использовании большого увеличения и таких технологий, как TIRF. Также система PFS последнего поколения характеризуется значительными усовершенствованиями, установив новый стандарт для изображения живых клеток. Усовершенствованный дизайн обеспечивает более легкий доступ к объективам и коррекционным кольцам. Доступны две модели: одна для визуализации в видимом УФ спектре, другая – для визуализации в ИК спектре (для многофотонной микроскопии).
Технология оптического смещения
Собственная технология Nikon позволяет сфокусироваться на желаемой высоте над покровным стеклом, одновременно детектируя границу поверхности покровного стекла. PFS немедленно исправляет смещения фокуса в результате движения стола во время получения многоточечного изображения или в результате падения температуры при добавлении реагента. PFS исключает необходимость получения дополнительных изображений в различных плоскостях в ожидании смещения фокуса, что приводит к минимизации воздействия света и фотообесцвечивания.
Корректировка смещения фокуса при добавлении реагентов
Изменение температуры, вызванное добавлением среды (указано на рисунке стрелкой), привело к смещению фокуса, если не используется PFS. При использовании PFS данная проблема полностью устраняется.
Настройка фокуса для получения более детальных изображений
Благодаря улучшенной оптике и чувствительности, система PFS позволяет корректировать смещение фокуса на значительно больших расстояниях от объектива и на большей глубине в образце, чем ранее. Данная возможность идеальна для биологии развития и исследований, которые изучают динамику клеток в толстых образцах, таких как ткани или органы. Поскольку система PFS может удерживать фокус на больших глубинах в тканях образца, могут быть четко получены изображения межсегментных сосудов вверх от спинной аорты.
Совместимость с различными флуоресцентными красителями
PFS использует светодиод с длиной волны 870 нм для обнаружения границы покровного стекла, позволяя визуализировать флуоресцентные изображения в ближней ИК области спектра красителей, таких как Cy5.5 без интерференции.
Кроме сосудов со стеклянным дном с системой PFS могут использоваться пластиковые сосуды.
Высокоскоростное моторизованное управление микроскопом
Синхронизированное управление различными моторизированными компонентами позволяет исследователям использовать микроскоп для проведения широкого спектра автоматизированных многомерных экспериментов. Ускоренное перемещение устройства и получение изображения сокращает общее время экспонирования образца и последующую фототоксичность, что позволяет получать более точные данные.
Фазовый контраст при использовании объективов с высокой числовой апертурой
Компанией Nikon разработан уникальный внешний фазовоконтрастный модуль. В этой системе фазовое кольцо встроено в корпус микроскопа, а не в линзы объектива, что позволяет получать высококачественные флуоресцентные и фазоконтрастные изображения при помощи объективов c большой числовой апертурой, которые не имеют встроенного фазового кольца.
В связи с отсутствием потери света, которое имеет место при использования фазового кольца, яркие изображения получаемые в режимах высокоинтенсивной флуоресценции, конфокальной микроскопии и TIRF, могут быть получены при помощи одного и того же объектива, а кроме того, возможны наблюдения по методу фазового контраста. Поскольку для фазовоконтрастных наблюдений используется объектив без фазового кольца, возможна работа с микропинцетами без смены объектива.
Стало возможным использовать водноиммерсионный объектив для фазоконтрастных наблюдений.
Расширенные функции флуоресцентного освещения
Серия микроскопов Ti предоставляет широкий выбор флуоресцентных осветителей для передовых исследований в клеточной биологии, молекулярной биологии и биофизики, благодаря новым технологиям получения изображения и фотоактивации.
Лазер TIRF (моторизированный/ручной)
TIRF лазер для наблюдения единичных молекул и процессов в клеточной мембране
Принцип метода TIRF (метод флуоресценции, основанный на полном внутреннем отражении)
Когда образец подвергается облучению лазерным лучом при углах падения больших, чем критический угол (θ) полного внутреннего отражения, луч не распространяется внутрь образца, но образуется быстрозатухающее поле на границе соприкосновения покровного стекла и образца, которое возбуждает флуоресценцию в образце на глубине до 100 нм. Путем возбуждения области соприкосновения образца и покровного стекла, можно получить флуоресцентные изображения с крайне высоким отношением сигнал-шум.
Принцип TIRF заключается в использовании высокой числовой апертуры 1,49, что является теоретическим пределом при использовании стандартной масляной иммерсии, а при этом возможна регистрация даже единичных молекул.
Регистрация изображений через заданный временной интервал путем переключения между методами наблюдения TIRF и флуоресценции с эпископическим осветителем.
Используется для наблюдений фотоактивируемых и фотопереключаемых флуоресцентных белков. Когда флуоресцирующие белки, такие как Kaede и PA-GFP, освещаются излучением 405 нм, характеристики флуоресценции изменяются. Например, белок Kaede изменяет цвет с зеленого на красный, а PA-GFP увеличивает интенсивность флуоресценции в 100 раз. Соответственно, белки Kaede и PA-GFP используются для избирательного выделения интересующих клеток и белков в живых образцах и изучения их динамики. В осветителе для фотоактивации используется лазер с диапазоном длины волны 405нм -647нм для образования пятен различных диаметров, что позволяет осуществлять наблюдения быстроразвивающихся процессов в живых клетках через заданные временные интервалы.
