Состав набора:
- 8 флаконов с готовой к употреблению питательной средой содержащей нитрат натрия (скошенный гель зеленовато-голубого цвета) №№1-7.
- 1 флакона № 8 с реактивом Грисса (кристаллический порошок серо-розового цвета).
- 2 стерильных шприцев.
Флаконы завальцованы неокрашенными алюминиевыми колпачками или цветными колпачками в соответствии с таблицей.
Определение лекарственной чувствительности и первичная идентификация микобактерий туберкулеза основаны на выявлении нитратредуктазной активности.
Подготовка ТБ тест-набора зависит от способа посева культур.
При посеве шприцем снимают центральную часть алюминиевого колпачка флаконов №№1-7, затем стерильной иглой от шприца объемом 5 мл в асептических условиях прокалывают резиновую пробку для дополнительной аэрации.
При посеве пипеткой в асептических условиях флаконы №№1-7 освобождают от метал-лических колпачков и резиновых пробок и перекрывают стерильными резиновыми коническими пробками.
Посев культур M.tuberculosis проводят в соответствии с приложением к Приказу МЗ РФ №109 «Инструкция по унифицированным методам микробиологических исследований при выявлении , диагностике и лечении туберкулеза», высевая по 0,2 мл микробной взвеси с концентрацией 5х107мк/мл во флаконы №№1 -7 с питательными средами. После посева с помощью шприца резиновую крышку каждого флакона обрабатывают в течение 5 минут ватным тампоном, смоченным в растворе дезсредства. Затем засеянные флаконы инкубируют при температу-ре (37±1)ºС в течение 8-14 суток в наклонном положении таким образом, чтобы инокулят равномерно распределялся по всей поверхности скоса среды. Для этого их помещают в упаковочную коробку с предварительно выдавленной перфорированной стенкой.
Учет результатов проводят визуально с реактивом Грисса. Непосредственно перед проведением учета результатов готовят 7,5-ный % раствор реактива Грисса путем добавления 5 мл дистиллированной воды, подогретой до температуры 50 ºС, к содержимому флакона № 8. Приготовленный раствор можно использовать в течение 14 суток при условии хранения его при температуре 2-8ºC, в темном месте.
Учет результатов. Через 8 суток инкубирования посевов в один из двух контрольных флаконов добавляют 0,5 мл раствора реактива Грисса с помощью шприца объемом 5 мл. Учитывают появление розовой или фиолетовой окраски во флаконах по цветовой шкале.
Возможны 3 варианта интенсивности окраски в контрольном флаконе:
— Если в контрольном флаконе интенсивность розовой или фиолетовой окраски не менее 3+, то продолжают внесение раствора реактива Грисса во все оставшиеся флаконы и регистрируют интенсивность окраски.
— Если в контрольном флаконе интенсивность окраски будет слабо-розовой или слабо-фиолетовой (менее 3+), этот флакон уничтожают, а все остальные флаконы тест-набора продолжают инкубировать до 10 суток. – 12 суток.
— Если в контрольном флаконе не будет появления розовой или фиолетовой окраски, этот флакон уничтожают, а все остальные флаконы ТБ тест-набора продолжают инкубировать до 12 -14 суток.
По истечении срока инкубации: через 10 -12 суток для варианта 2 и через 12 – 14 суток для варианта 3,- вносят раствор реактива Грисса во все оставшиеся флаконы и проводят учет результатов.
Не инкубировать флаконы ТБ тест-набора более 14 суток, т.к. возможно получение ложноположительных результатов.
Интерпретация результатов. Культура считается чувствительной, если во флаконе с лекарственным препаратом не произошло появления розовой или фиолетовой окраски (при интенсивности окраски в контрольном флаконе не менее 3+).
Культура считается устойчивой, если во флаконе с лекарственным препаратом произошло появление розовой или фиолетовой окраски (при интенсивности окраски в контрольном флаконе не менее 3+).
Первичная идентификация микобактерий туберкулеза осуществляется через 8-14 суток инкубирования посевов по появлению розовой или фиолетовой окраски во флаконе №3 с ТКГ и отсутствию окраски во флаконе №2 с салицилатом натрия после внесения раствора реактива Грисса (при интенсивности окраски в контрольном флаконе не менее 3+).
Хранение: в защищенном от света месте при температуре 2-8 ºС.
