Приготовление среды:
В асептических условиях вскрыть флакон и заменить резиновую пробку флакона на стерильную ватно-марлевую. Расплавить среду на водяной бане (не кипятить!), охладить до 48 – 50°С, добавить селективную добавку, согласно инструкции по применению добавки, и разлить в стерильные чашки Петри. Среда готова к применению.
Посев на среду ПАЛКАМ производят из пробирок с селективной средой для обогащения (ПБЛ II или бульон Фразера) после инкубации, независимо от наличия или отсутствия признаков роста, в том числе почернения. Посев производят бактериологической петлей из культуральной жидкости на поверхность агара. Посевной материал распределяют по поверхности шпателем или наносят петлей в виде штриха. Допускается проводить пересев параллельно на поверхность двух плотных селективно-диагностических сред (например, можно использовать дополнительно ПАЛ-агар или Оксфордский агар).
Посевы инкубируют при температуре 37 ± 1°С в течение 24 — 48 ч.
После инкубирования чашки с посевами просматривают и отмечают рост характерных колоний.
На среде ПАЛКАМ через 24 часа инкубации листерии образуют мелкие серовато-зеленые или оливково-зеленые колонии с черным ореолом диаметром от 1 до 1,5 мм, иногда с черным центром. Через 48 часов колонии диаметром 1,5-2 мм приобретают зеленую окраску с углубленными центрами, окруженными черным ореолом. Посторонняя кокковая микрофлора образует выпуклые желтые колонии диаметром от 1 до 4 мм.
При появлении сплошного роста листерии проводят пересев бакте¬риологической петлей штрихами на поверхность двух чашек Петри с агаром ПАЛКАМ для получения изолированных колоний.
При отсутствии роста характерных колоний листерии на ПАЛКАМ агаре исследование прекращают и делают заключение об отсутствии Listeria monocytogenes в исследуемой пробе продукта.
Срок годности питательной среды в прохладном, защищённом от све¬та месте в герметично укупоренном флаконе — 6 месяцев.
Не вскрытый флакон с селективной добавкой хранится в рефрижераторе при температуре до 8°С в течение года.
Раствор селективной добавки хранится при 2 – 8°С в течение 4 суток.
Чашки Петри с разлитой в них средой хранятся не более 22 суток в защищенном от света месте и при температуре не выше 8°С.
