- Продукты питания, напитки, корма и комбикорма
Качественный и количественный состав аминокислот определяет ценность продуктов питания и кормов, помогает скорректировать рацион в случае необходимости. - Лекарственные препараты
Качественный и количественный состав аминокислот в белковых, пептидных и других фармацевтических препаратах позволяет установить их подлинность. Кроме того, аминокислотный анализ может быть использован в качестве дополнительного инструмента при анализе структуры белка и пептида, а также для оценки стратегий фрагментации в пептидном картировании и для обнаружения атипичных аминокислот, которые могут присутствовать в белке или пептиде (ОФС.1.2.1.0025.18). - Биологические жидкости
Уровень аминокислот в крови и их производных позволяет оценить состояние аминокислотного обмена, диагностировать или подтвердить нарушение обмена аминокислот и ряд других заболеваний, связанных с их метаболизмом.
Как известно, анализ аминокислот (АК) методом ВЭЖХ проводят с использованием методов предколоночной или постколоночной дериватизации, так как сами по себе они не поглощают свет в УФ – и видимой области спектра. Серия жидкостных хроматографов «скороход» предлагает функционал как предколоночной дериватизации при помощи автодозатора, так и постколоночной дериватизации при помощи высокотемпературного реактора. Однако, сочетая обе возможности в своей линейке, для анализа аминокислот мы традиционно предлагаем и рекомендуем именно постколоночный метод с дериватизацией нингидрином. Этот метом соответствует действующим нормативным документам.
- Российская фармакопея: ОФС.1.2.1.0025.18, ФС.3.1.0108.22
- Европейская фармакопея: 2.2.56
- Американская фармакопея: USP <1052> Amino Acid Determination
- ГОСТ 32195-2013 (ISO 13903:2005). Корма, комбикорма. Метод определения содержания аминокислот
- ГОСТ 33428-2015 (ISO 17180:2013). Корма, премиксы. Определение содержания лизина, метионина и треонина
- ГОСТ 54743-2011, 32799-2014. Продукция соковая. Определение свободных аминокислот методом ионообменной хроматографии
- ГОСТ 34132-2017. Мясо и мясные продукты. Метод определения аминокислотного состава животного белка
- ГОСТ 13496.21-2015. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения лизина и триптофана
Постколоночная дериватизация имеет ряд преимуществ в точности и стабильности получаемых результатов вне зависимости от сложности (загрязненности) матрицы, концентрации гидролизованного белка.
При этом, что немаловажно, метод является полностью автоматизированным. Посмотрим на сравнительную таблицу ниже, чтобы убедиться в приведенном тезисе.
Благодаря указанным преимуществам метода в Европе именно постколоночная дериватизация является «золотым стандартом» при анализе АК и используется в качестве поточного метода, а не от случая к случаю, если нужно провести единичный анализ, в отличие от предколоночной дериватизации.
Благодаря указанным преимуществам метода в Европе именно постколоночная дериватизация является «золотым стандартом» при анализе АК и используется в качестве поточного метода, а не от случая к случаю, если нужно провести единичный анализ, в отличие от предколоночной дериватизации.
Аминокислотный анализатор АКА-1000, как и вся продукция компании Sevko & Co, производится на собственных мощностях компании на площадке в Подмосковье по полному циклу. Аминокислотный анализатор представляет из себя жидкостной хроматограф «Скороход», в котором все детали и механизмы, соприкасающиеся с подвижной фазой и пробой, выполнены из инертных материалов (ПЭЭК, ПТФЭ, сапфир), что позволяет использовать высокосолевые буферы в качестве подвижной фазы, причем в приборе отсутствуют компоненты из западных стран, что обеспечивает
- быстрые сроки производства и поставки (60 календарных дней);
- стабильность и ритмичность производственного процесса;
- независимость от санкционного давления третьих стран;
- расширенный гарантийный период (2 года).
Аминокислотный анализатор АКА-1000 – это законченное решение для анализа аминокислот, которое готово к работе сразу из коробки. В комплект анализатора входят все необходимые реактивы на 500 анализов, приготовленные в лаборатории компании Sevko&Co, а также колонки собственного производства:
- Буфер А1 – Na+/Li+ система
- Буфер В1 – Na+/Li+ система
- Буфер С1 – только Li+ система
- Раствор для регенерации
- Раствор для разбавления образцов
- Нингидриновый реагент
- Стандартная смесь аминокислот для построения калибровки
- Аналитическая колонка с ионообменной смолой, в Na+ форме, 150 х 4,6 мм, 7 мкм для анализа до 20-ти основных аминокислот. Эту колонку обычно применяют при анализе гидролизатов белков в простых матрицах: кормах и комбикормах, фармпрепаратах.
или
- Аналитическая колонка с ионообменной смолой, в Li+ форме, 150 х 4,6 мм, 7 мкм для анализа до 50-ти аминокислот. Эту колонку обычно применяют при проведении анализа в сложных матрицах: биологических жидкостях, экстрактах из растений, пищевых продуктах и напитках.
- Фильтр-ловушка для аммиака
- Постановка методики на вашей площадке
- Методическая и сервисная поддержка в течение всего жизненного цикла анализатора от Производителя в РФ
Классическая конфигурация анализатора снабжена спектрофотометрическим детектором с двумя фиксированными длинами волн (440 и 570 нм) и светодиодами в качестве источника излучения, а также модулем постколоночной дериватизации, представляющем из себя стандартный модуль из серии «Скороход», в который интегрированы термостат колонок, насос для подачи нингидринового реагента и высокотемпературный реактор.
Модуль постколоночной дериватизации автономен и может быть сочленен с любой ВЭЖХ-системой
Модуль постколоночной дериватизации автономен и может быть сочленен с любой ВЭЖХ- системой. Эта разработка компании Sevko & Co имеет более чем 12-летний опыт успешного применения по всей России и странам ближнего зарубежья не только с хроматографами «Скороход», но и совместно с хроматографами марок Shimadzu, LicArt 62, Agilent, Knauer. Она явилась первым модулем, выпущенным компанией на рынок в 2013 г. и заложившим фундамент всему многообразию ВЭЖХ из серии «Скороход».
Опционально модуль постколоночной дериватизации АРМ-1000Н может быть оснащен фотохимическим реактором. В качестве дериватизующего агента в данном случае используется УФ-излучение (254 или 365 нм). Этот способ дериватизации не требует использования химикатов, дополнительного насоса для подачи реагента, не происходит разбавления образца. Кроме того, отпадает необходимость заботиться о стойкости дериватизующего агента. Однако, как и в любом методе, существуют свои ограничения и дополнительные факторы, которые нужно учитывать, чтобы реакция прошла эффективно: рH среды, присутствие буферов, ион-парных реагентов, кислорода, состав подвижной фазы, длина волны и интенсивность излучения, время экспозиции — все это может влиять на кинетику реакции в зависимости от ее типа. Фотохимический реактор устанавливается в модуль вместо дозирующего насоса и/или термостата колонок.
Альтернативная конфигурация анализатора предполагает использование флуориметрического детектора со светодиодными источниками излучения и ортофталевого дериватизующего реагента, позволяющего в некоторых случаях определять аминокислоты в меньших концентрациях. Однако нужно иметь ввиду, что для того, чтобы определять не только первичные, но и вторичные аминокислоты в данном случае понадобится дополнительное предварительное окисление смеси, что снижает выигрыш в чувствительности метода.
В обоих конфигурациях используются светодиодные детекторы, имеющие ряд серьезных эксплуатационных преимуществ.
- Специфичная длина волны в отличие от ламп широкого спектра
- Более высокая светоотдача по сравнению с лампами широкого спектра
- Более высокая стабильность излучения, чем у ламп широкого спектра
Более низкие пределы обнаружения
- Не требуют прогрева перед применением
- Служат в разы больше ламп широкого спектра, практически вечные, отсюда — существенная экономия ресурсов на обслуживание
- Гораздо более низкая стоимость детектора без компромиссов с чувствительностью: не требуется монохроматора, фильтров, источник питания для светодиодов дешевле, чем для ламп.
Ещё больше технических решений для уверенности в результатах анализа
- Беспульсационные насосы для подачи реагента и элюента
Последовательный плунжерный механизм для беспрерывной подачи регентов, исключающей нестабильность и пульсации насоса. Благодаря высокой частоте и малому ходу (8 мкл) плунжеров вклад в пульсации системы отсутствует в отличие от традиционных длинноходовых насосов.
- Производительность и высочайшая точность дозирования
Уникальный для российского рынка автодозатор прямого дозирования пробы из иглы («split-loop»), обладающий высоким быстродействием (один цикл дозирования пробы с промывкой иглы до и после анализа составляет лишь 50 с) и вместимостью (153 х 2 мл) увеличивает производительность лаборатории кратно по сравнению с автодозаторами аспирационного типа («pulled-loop»). Высочайшая точность ввода пробы обеспечивается дозирующим насосом с шаговым двигателем разрешением 0,08 мкл на 1 шаг. Учитывая, что он используется в режиме деления шага 1 к 16, то дискретность дозирования получается равной всего-навсего 0,005 мкл, что позволяет дозировать объемы во всем диапазоне от 0,1 до 100 мкл с шагом 0,01 мкл точно и воспроизводимо.
Нулевой кросс-перенос
Нулевой кросс-перенос обеспечивается проточным дизайном иглы, отсутствием лишних элементов в конструкции (инжекционный порт и дозирующий кран совмещены: отсутствует трансферная линия, нет буферной трубки в отличие от автодозаторов типа «pulled-loop»), а также активной промывкой внешней поверхности иглы. Внутренняя поверхность иглы непрерывно промывается подвижной фазой. Отбирается строго ваш аналитический объем. Нет потерь пробы, как в автодозаторах типа «pulled-loop», на заполнение длинной буферной трубки.
Масс-спектры, полученные на BrukerMaxis Impact HD (Q-TOF) с хроматографом «Скороход» в качестве фронтального ВЭЖХ: сверху –– пустая проба; снизу –– растительный экстракт. Условия: однократная промывка.
Инертизация всей системы
Дериватизующие реагенты, а также буферы, как и все жидкостные линии системы, находятся под подушкой инертного газа (N2), что позволяет избежать окислительной деструкции и загрязнения реагентов. Лоток для бутылей с системой подачи инертного газа снабжен регулятором давления, а также специальными крышками с клапанами, которые позволяют поддерживать давление газа в системе.
- Интегрированный в насос или модуль для постколоночной дериватизации термостат колонок
Термостат колонок позволяет поддерживать высокие температуры (до 99 °С), необходимые для анализа аминокислот, с высокой точностью (±0.5 ℃) и стабильностью (±0.1℃).
Высокотемпературный реактор
Регулируемая температура реактора от 50 до 150 °С с катушкой-капилляром длиной до 30 м для проведения реакции дериватизации. Автоматическая промывка капилляра после каждой инжекции предотвращает его закупорку. Защита от перегрева и мониторинг давления в режиме реального времени позволяют проводить реакцию при высоких температурах.
Большие сенсорные экраны на каждом модуле
Позволяют отслеживать текущие и установленные параметры системы, производить автоматическую промывку жидкостных линий, экстренно выключать систему в случае возникновения внештатных ситуаций. Интуитивно понятная цветовая кодировка и возможность работы в перчатках делают повседневные операции комфортными и удобными для пользователя.
Система безопасности заботится об операторе и надлежащем функционировании ВЭЖХ
- датчики течи во всех модулях;
- датчик открытия двери автодозатора с блокировкой движения манипулятора с иглой гарантирует отсутствие травм оператора;
- датчик распознавания типа планшета и его наличия предотвращает неправильную установку планшета и повреждение иглы;
- датчик отсутствия виалы: игла никогда не заколет воздух;
- система защиты иглы от изгиба или излома;
- защита от выхода давления за установленные пределы;
- защита от перегрева источников излучения в фотометрических детекторах.
Альтернативные применения постколоночной дериватизации
Постколоночная дериватизация является эффективным и распространенным методом не только для определения АК, например, в полном соответствии ГОСТ 32195-2013 (ISO13903:2005), ГОСТ 33428-2015, ГОСТ 54743-2011, ГОСТ 32799-2014, ГОСТ Р 59296-2021, ГОСТ 34132-2017, но и для широкого ряда соединений, которые сложно достоверно определить в малых концентрациях без использования цветных реакций. Ниже приведен список основных аналитов, для которых можно использовать АКА-1000 с незначительными модификациями.
- Биогенные амины.
- Редуцирующие и фосфорилированные редуцирующие сахара.
- Анионы переходных и тяжелых металлов.
- Монезин, наразин и салиномицин.
- Мадурамицин аммония.
- Семдурамицин натрия.
- Гидрат гадодиамида.
- Водорастворимые витамины B1, B2, B6 (ГОСТ 32903-2014).
- Афлатоксин B1 (ГОСТ 32251-2013).
- Афлатоксина B1 и суммы афлатоксинов B1, B2, G1 и G2 (ЕН-12955).
Если вы не нашли в списке интересующих вас соединений, обратитесь к вашему менеджеру. Мы обязательно адаптируем анализатор для решения именно вашей аналитической задачи.
