Амплификаторы — это приборы, которые используются для осуществления полимеразной цепной реакции, т.е. ПЦР. С его помощь уже во время анализа можно выявить наличие определенных нуклеиновых последовательностей и количества их копий. На данный момент такой метод является самым современным, надежным и точным. Прибор состоит из 3-частей: термоблок, система термостатирования и блок управления.
ДНК-амплификатор в «реальном времени» — оборудование, предназначенное для реализации полимеразной цепной реакции (ПЦР) с выявлением итогов амплификации в порядке реального времени. Полимерная цепная реакция в реальном времени (также именуемая количественной ПЦР, кПЦР, или qPCR) имеет способность совершать увеличение копий выбранного отрезка ДНК и производить концентрировать количество продуктов ПЦР не в конце реакции, как это происходит с классическим ПЦР-оборудованием, а сразу же в момент амплификации.
Принцип работы
ДНК-амплификаторы в реальном времени – по сути термостаты. Принцип работы заключается в циклическом нагреве и охлаждении пробирки, внутри которой находится исследуемое вещество. Смесь для выделения реакции состоит из следующих элементов: ДНК-матрица с необходимым для тестирования участком, несколько праймеров, фермент-катализатор, дезоксирибонуклеиновая кислота, ионы Mg (магния) и буферный раствор.
Каждый этап амплификации состоит из трёх шагов:
- денатурация: уничтожение связей водорода между молекулами, делается это для того, чтобы двухцепочечные молекулы стали двумя одноцепочечными. В этот период амплификатор нагревается до температуры 94–98°С;
- отжиг или присоединение праймеров: так называются подобранные специально для реакции короткие фрагменты ДНК, которые дополняют участки ДНК образца, в результате чего начинается новый синтез. Температура при этом снижается до 40–75°С;
- элонгация: это синтез новой цепочки ДНК, происходит процедура при температуре 60–75°С.
Амплификатор следит за копированием и накоплением участка нуклеиновой кислоты, так как эти процессы важны для точной работы прибора. Во время этого процесса прибором строится график, показывающий зависимость флуоресценции от номера цикла, это напрямую отражает результаты исследования.
Преимущества
ДНК-амплификаторы в реальном времени используются для проведения всех ступеней тестирования параллельно, расходуя всего одну пробирку на тест и опуская этап визуализации. Благодаря этому не случается загрязнение элементами ПЦР, риск получения ложных результатов (в основном положительных) становится значительно ниже.
Диапазон работы у амплификаторов в реальном времени значительно шире, чем у их классических коллег. Благодаря этому на первый план выходит значительный плюс, которым они обладают — это более высокая точность исследований.
Как выбрать и приобрести амплификаторы в реальном времени?
Специалисты нашей компании помогут подобрать амплификатор, исходя из ваших нужд.
Следует обращать особое внимание на данный функционал:
- скорость нагрева и охлаждения, она зависит исключительно от материалов, из которых производят термоблок. Высший оборот нагрева находится в пределах 10 градусов в секунду, охлаждения — 5 градусов в секунду;
- сделать процесс анализа точнее и эффективнее поможет температурный градиент. Его присутствие — залог наилучшего подбора параметров цикла;
- наличие одного или нескольких нагревательных элементов — дает возможность проводить несколько тестов одновременно, даже на разных этапах. Этот параметр выбирают, отталкиваясь от загрузки лаборатории.
