Клетки ДНК присутствуют в жизни каждого
живого организма, обеспечивая хранение и передачу наследственной информации.
Изучение нуклеиновых кислот и работа сними на протяжении многих лет, показали, что синтез ДНК осуществляется благодаря нескольким молекулам-ферментам:
- ДНК-гираза
Обеспечивает пластичность цепочек, добавляя в цепочку временные разрывы
- Хеликаза
Делит парные цепочки молекул на одинарные цепи
- SSB-белки
Облегчает связь одинарных фрагментов цепей и защищает синтез от комплементарных спариваний
- Праймаза
Добавляет в формируемую цепочку РНК-праймер (праймер инициирует работу ДНК-полимеразы, запуская её активность с помощью нуклеотидов РНК)
- Белки скользящего зажима
Несут на себе функцию, контролирующую, защищающую, и направляющую функцию для цепочки ДНК. Функционируют благодаря креплению к цепочке ДНК по траектории окружности.
- ДНК-полимераза
Синтезирует активные ферменты клетки ДНК, и стабилизирует их. Синтез активной стороны цепочки проходит постоянно; обратная сторона — синтезируется фрагментами.
- РНКаза Н
Растворяет неиспользованные при синтезе ферменты клеток
- ДНК-лигаза
Связывает сформированные звенья одинарных цепей ДНК
- Теломераза
Делает траекторию цепей ДНК закономерной и повторяющейся
- Реплисома
Расплетает и наращивает комплементарные цепи ДНК на протяжении всего синтеза
Важнейшая в этом перечне – полимераза, фермент, обеспечивающий рост нуклеиновых кислот благодаря стабилизации остальных ферментов на клеточной матрице.
Ключевой особенностью этого фермента является то, что полимераза не создаёт звенья цепочек с самого начала, а реплицирует (повторяет) предыдущие. Репликация проходит с двух сторонцепочек, что позволяет обеспечивать непрерывный рост нуклеиновых кислот.
Применение полимеразы
Начиная с 1958 года, после полной дешифровки ДНК-цепочки исследования ферментов продолжаются непрерывно. Одним из важнейших открытий для микробиологии стало то, что при соблюдении нужных условий, ДНК- полимераза может нести не только реплицирующую, но и восстановительную функцию для белка.
Таким образом, полимераза необходима для выявления вирусов при исследовании ПЦР, поскольку функция ДНК-полимеразы позволяет реплицироватьнеобходимое для процедуры количество белка, и синтезировать нужное количество клеток.
С момента открытия полимеразы прошло уже больше полувека. Современные методы синтеза полимеразы позволяют производить её в промышленных масштабах благодаря дублированию каталитических ферментов.
Синтез полимеразы возможен только в водянистой среде, при температуре не менее 55 ℃ и не более 70 ℃. Работа с ферментом также должна проводиться в этих температурных рамках. Отклонение от температурных норм во время хранения фермента или работы с реактивом может быть опасно для структуры фермента.
Применение ДНК–полимеразы позволяет увеличить скорость синтеза молекул при работе с клетками. Приобрести ДНК-полимеразу можно как отдельно, так и в комплекте с индивидуальным набором реактивов. В ассортименте есть буферные растворы разной концентрации, все они рассчитаны на следующие типы анализов:
- Генетические
Генетические анализы проходят с использованием буферной смеси, содержащей обычную концентрацию ионов.
- Анализы на полимеразную цепную реакцию
Анализы ПЦР бывают стандартными и ускоренными (экспресс-анализы). В первом случае используется буферная смесь с обычной концентрацией ионов, во втором – с повышенной.
Также, отличием проведения экспресс-тестов ПЦР является использование высокоточной ДНК-полимеразы, так как воздействие температур при ускоренном методе анализа – выше.
Компания Элтемикс зарекомендовала себя на рынке лабораторного оборудования и реактивов прежде всего тем, что больше 20 лет применяет избирательный подход в выборе поставщиков. Ознакомиться с перечнем профессионального лабораторного оборудования можно в каталоге компании.
